PCR dans l'analyse de l'ADN

Les services de police, les procureurs et les laboratoires criminels du monde entier ont exploité la puissance de la réaction en chaîne par polymérase (PCR) pour faciliter les enquêtes sur les scènes de crime.La PCR aide à créer des profils ADN, qui servent de « code-barres » unique à chaque individu, ce qui en fait l'un des grands cas où la biologie et la technologie fusionnent pour résoudre des problèmes sociaux.

EN QUOI SOMMES-NOUS DIFFÉRENTS ?

À la fin du projet sur le génome humain, il a été déterminé que le génome est composé d'environ 3 millions de bases.Parmi eux, environ 99,5 % sont identiques chez tous les humains, ce qui implique que nous ne sommes pas si différents après tout.

La variation que nous observons et qui rend chacun de nous unique se révèle être principalement due aux différences dans le nombre de séquences répétées pour des régions particulières du génome.Parmi ces régions, la répétition en tandem courte (STR) a été identifiée et est la répétition la plus couramment utilisée (utilisant 13 loci ou régions) en application aujourd'hui.

PROFILAGE D'ADN PAR STR

STR est composé de 3 à 4 bases nucléotidiques répétitives trouvées dans différents locus du génome humain.Chaque individu hérite de deux copies, ou allèles, de ses parents. Un profil STR pourrait donc être construit.

Pour différentes populations, plusieurs locus ont été utilisés comme standard dans l'identification des individus.Pour correspondre aux profils STR, les nombres de répétitions pour chaque allèle doivent être les mêmes.Par exemple, au locus D3S1358 (voir Figure 1), si l'échantillon obtenu présente un profil STR à ce locus de 7,5, alors le suspect B est déjà exclu pour correspondre à l'échantillon obtenu.Si les profils alléliques correspondent, la probabilité est calculée en fonction de la fréquence de l’allèle pour un emplacement particulier.Cela implique que le suspect n'est pas automatiquement la source définitive de l'échantillon lorsque les profils STR correspondent.

Des bases de données ont également été créées pour faciliter le processus d'enquête, comme le Combined DNA Index System (CODIS), géré par le FBI américain.

PCR DANS LE FLUX DE TRAVAIL DE PROFILAGE STR

1. Les enquêtes commencent par la collecte de matériel biologique tel que des dents, des cheveux, des os et des liquides sur la scène du crime.
2. Les échantillons sont ensuite transférés au laboratoire médico-légal pour un traitement ultérieur où l'ADN est extrait des échantillons (~ 1 ng d'échantillon est suffisant pour la PCR).

3. Les locus STR spécifiques sont ciblés et amplifiés par PCR.Les fragments de PCR sont ensuite analysés par séquençage ou électrophorèse.

4. Les profils STR sont ensuite générés et, s'ils sont disponibles, vérifiés avec des profils ou des bases de données suspects.
Le profilage STR nécessite des thermocycleurs robustes pour faciliter le processus d’investigation.Des résultats fiables sont nécessaires lors des expérimentations en laboratoire humide pour aider les services de police et les procureurs dans leurs rapports.Esco Lifesciences propose des thermocycleurs avec d'excellents taux de chauffage et de refroidissement, une température précise et uniforme pour garantir des profils STR fiables.