Lignes directrices de laboratoire pour la détection de l'infection par le virus Monkeypox

Le Directeur général de l'Organisation mondiale de la santé (OMS) a déclaré l'épidémie mondiale croissante de variole du singe une urgence de santé publique de portée internationale (PHEIC) le 23 juillet 2022. Selon l'OMS, il y a plus de 35 000 cas dans 92 pays/territoires, et 12 décès au 17 août. La plupart des cas signalés (avec antécédents de voyage) se sont rendus dans des régions d'Europe et d'Amérique du Nord.

La variole du singe est une maladie rare causée par une infection par le virus de la variole du singe (MPXV), un virus à ADN double brin enveloppé qui appartient à la même famille de virus qui causent la variole.Ce virus peut être transmis par contact avec des fluides corporels, des lésions cutanées ou des surfaces muqueuses internes avec des symptômes tels que fièvre, maux de tête et douleurs musculaires.La période d'incubation de la variole du singe dure généralement de 6 à 13 jours, mais peut aller de 5 à 21 jours (environ trois semaines).
Selon l'OMS, les meilleurs échantillons de diagnostic proviennent directement de l'éruption cutanée, de liquide ou de croûtes, ou d'une biopsie si cela est possible.D’autres méthodes telles que la détection des antigènes et des anticorps peuvent ne pas être utiles car elles ne font pas la distinction entre les orthopoxvirus.

Une approche basée sur les risques est recommandée lors de la manipulation des échantillons provenant des cas suspectés, probables ou confirmés de variole du singe en laboratoire.Par conséquent, les procédures de détection de la présence du MPXV, classé comme agent pathogène du groupe de risque 3, doivent être effectuées dans un laboratoire de niveau de biosécurité 2 en utilisant la liste des équipements indiquée ci-dessous.

Guide de l'équipement pour la détection du virus Monkeypox

Stockage des échantillons et des réactifs

Il est recommandé de réfrigérer les échantillons MPXV entre 2 °C et 8 °C ou de les congeler (-20 °C ou moins) dans l'heure suivant le prélèvement.Si la durée du transport dépasse sept jours, les échantillons doivent être conservés à -20°C ou moins.Pendant ce temps, une température de -70 °C est conseillée pour le stockage à long terme des échantillons (>60 jours à compter du prélèvement).

Les réfrigérateurs, congélateurs de laboratoire et congélateurs à ultra-basse température de laboratoire Biobase sont équipés de systèmes de réfrigération bien conçus et de matériaux de haute qualité adaptés au stockage d'échantillons biologiques sensibles à la température qui nécessitent des conditions de stockage critiques.

Manipulation et préparation des échantillons

Le MPXV peut être transmis pendant la phase de traitement des échantillons en raison de matériaux contaminés ou de méthodes inappropriées.En conséquence, des mesures de biosécurité renforcées doivent être respectées.Avant l'inactivation des échantillons, les échantillons provenant de patients suspectés de MPXV doivent être préparés dans une enceinte de biosécurité fonctionnelle de classe II ;cependant, cela n’est pas requis pour les échantillons correctement inactivés.

Outre la protection offerte par les enceintes de biosécurité, les enceintes de sécurité biologique Biobase Classe II sont conformes aux normes NSF 49 et EN 12469 avec des caractéristiques conviviales et sont recouvertes de poudre antimicrobienne sur toutes ses surfaces peintes externes et internes pour une sécurité améliorée.Les centrifugeuses sont nécessaires pour la séparation des composants liquides et solides de l’échantillon.Des coupelles de sécurité ou des rotors scellés sont conseillés s’ils sont essentiels à la procédure.

Détection et analyse

Des tests d'amplification des acides nucléiques (TAAN) sont effectués pour confirmer l'infection par le MPXV.Pour détecter des séquences d'ADN viral uniques, la PCR en temps réel ou la réaction en chaîne par polymérase (PCR) conventionnelle est utilisée.La détection des virus comporte deux étapes.La première PCR détecte les orthopoxvirus mais n'identifie pas l'espèce tandis que la seconde PCR (ou séquençage) détecte spécifiquement le MPXV.

Un thermocycleur PCR en temps réel permet une amplification efficace des acides nucléiques pour l'analyse des virus.Biobase propose les nouveaux thermocycleurs Swift™ PCR avec un ordinateur intégré pour un fonctionnement autonome à partir de l'entrée, de la surveillance et de l'analyse du programme PCR.