Un acteur majeur de la spectrophotométrie est l’absorption de la lumière qui permet une analyse qualitative et quantitative facile.
Ainsi, pour entreprendre la spectrophotométrie, l'utilisation d'un spectrophotomètre est nécessaire, car il est construit avec à la fois un spectromètre et un photomètre.Les autres composants d'un spectrophotomètre comprennent une source de lumière (monochromateur), une cuvette et un détecteur de lumière, ainsi qu'un logiciel d'analyse de données.
Application du spectrophotomètre
-Chimie
-biochimie (pour les réactions catalysées par des enzymes)
-La physique
- La biologie
-Etudes cliniques
Les tests de la qualité de l’eau ont été facilités grâce à un spectrophotomètre.Dans quelle mesure l'eau est-elle potable, à quel point elle est pure et claire, quelles propriétés elle contient, etc. Tout cela peut être testé rapidement et à moindre coût grâce à un spectrophotomètre.
Avant que les médicaments ne soient mis à la disposition de la société, ils doivent être soumis à des tests rigoureux pour garantir qu’ils fonctionnent aux fins pour lesquelles ils ont été créés.Un spectrophotomètre s’est avéré être un moyen permettant d’économiser du temps et de l’argent.
Types de spectrophotomètre
Il existe deux principaux types de spectrophotomètres, à savoir le spectrophotomètre à simple faisceau et le spectrophotomètre à double faisceau.Ces deux spectrophotomètres peuvent entreprendre différents types d'analyses et n'ont pas les mêmes spécifications.
Le spectrophotomètre monofaisceau
Le spectrophotomètre à faisceau unique est conçu pour donner de la lumière à travers un échantillon en fournissant un seul faisceau.Ce spectrophotomètre est conçu pour une analyse plus détaillée et est préférable pour fournir un taux dynamique plus élevé.Leur conception est également compacte, ce qui signifie qu’ils peuvent être facilement déplacés.
Le spectrophotomètre à double faisceau
Ce type de spectrophotomètre est conçu dans un souci de précision, car il peut libérer des faisceaux doubles, qui assumeraient des fonctions spéciales pour aider à obtenir un rapport plus précis et plus précis.Ainsi, dans ce cas, leur automatisation est plus transparente en raison de leur double configuration procédurale.
Plus de types :
Spectrophotomètre à fluorescence
-Spectrophotomètre d'absorption atomique.
-Micro spectrophotomètre
-Spectrophotomètre visible
-Spectrophotomètre UV-VIS
Niveau d'absorbance et de transmission
L'utilisateur peut contrôler la température d'un bain-marie de laboratoire de sérologie en utilisant une interface numérique ou analogique.Une lumière indiquera généralement que le bain-marie fonctionne, et une fois la bonne température atteinte, le bain-marie s'allumera et s'éteindra pour maintenir la température constante.Certains bains-marie de laboratoire sont dotés d'un réglage de sécurité empêchant l'eau de chauffer à une température plus élevée.
Différents types de bains-marie de laboratoire existent également, par exemple les bains-marie à agitation, qui sont utilisés pour mélanger des substances et disposent de commandes supplémentaires permettant aux utilisateurs de contrôler la vitesse et la fréquence des mouvements.Les bains-marie de laboratoire ne doivent pas nécessairement contenir d'eau et peuvent utiliser des fluides alternatifs tels que de l'huile en fonction de la température et de la viscosité requises. Pour entreprendre son processus, le spectrophotomètre doit connaître le niveau d'absorbance et de transmission de la solution.Ainsi, lorsque la lumière passe à travers, le niveau d’absorbance et de transmission déterminerait le processus que le scientifique devrait suivre pour rendre son analyse précise.C’est pourquoi une cuvette est utilisée comme récipient d’échantillon, pour savoir dans quelle mesure elle absorberait la lumière.
Cependant, la transmission du processus doit être calculée à l’aide de l’équation suivante :
Transmission (T) = It/I0
It = Intensité lumineuse après passage de la cuvette (lumière transmise)
I0 = Intensité lumineuse avant passage de la cuvette (lumière incidente)
Absorbance (A) = – log10 T = – log IS/IR
De plus, l'absorbance peut être mesurée avec cette équation, combinant à la fois la loi de Beer-Lambert et le spectrophotomètre : A = ƐCL.
A = absorbance de la lumière à une longueur d'onde spécifique
Ɛ = coefficient d'extinction molaire (l'absorbance de 1 mole d'une substance dissoute dans 1 litre de solvant)
C = la concentration molaire d'un échantillon
L = la longueur du chemin optique d'un échantillon.
Mesurer l'absorption avec un spectrophotomètre
Pour ce faire, il est nécessaire d’obtenir plus d’informations sur la valeur du coefficient d’extinction molaire, la longueur du trajet optique et la concentration molaire.
Coefficient d'extinction molaire – Ɛ est la valeur à laquelle la lumière à une longueur d'onde donnée s'accentue avec la solution chimique.
L'unité SI est m2/mol mais parfois exprimée en M-1 cm-1 ou L mol-1 cm-1.Le coefficient d'extinction molaire peut également être dérivé de sources documentaires dans les bibliothèques et en ligne.
